酶聯免疫試劑盒應嚴格遵照規定操作，必能得出準確的結果。首先應選取的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證酶聯免疫試劑盒檢測結果準確可靠的必要條件。所以酶聯免疫試劑盒試劑盒的購買，試劑質量的保證以及實驗前實驗儀器的檢察都是很重要的。

　　1、標本的采集及保存：

　　①、血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃經過一夜夜后于1000x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　②、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2-8°C1000x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　③、細胞培養物上清或其它生物標本：請1000x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　④、樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋10，000倍。

　　

　　2、試劑的準備：

　　按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑，酶聯免疫試劑盒中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質量的，自配的緩沖液應用pH計測量較正，從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。

　　

　　3、加樣：

　　分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　

　　4、溫育：

　　用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　

　　5、洗滌：

　　小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

　　

　　6、顯色：

　　每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

　　

　　7、測定：

　　以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。