產品名稱：人腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人腫瘤壞死因子α（TNF-α）水平。用純化的人腫瘤壞死因子α（TNF-α）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入人腫瘤壞死因子α（TNF-α），再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人腫瘤壞死因子 α（TNF-α）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人腫瘤壞死因子 α（TNF-α）含量。
試劑盒組成：
注：標準品濃度依次為：80、40、20、10、5、0 pg/mL.
樣本處理及要求：
1.血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收 集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2.血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100萬/ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上 進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL；。
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁， 輕輕晃動混勻。
3.加酶：每孔加入酶標試劑 100μl，空白孔除外。
4.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。
5.配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。
6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。
7.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯 色 15 分鐘.
8.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
9.測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如 未用完，板條應裝入密封袋中保存。樣本在使用前也要在室溫平衡 60 分鐘。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時盡量控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，盡量做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值 大于標準品孔first孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
（此圖僅供參考）
試劑盒名稱：人腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒
關鍵詞：人腫瘤壞死因子α，TNF-α，ELISA試劑盒
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值為 0.95 以上。
2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于10%和15% 。
檢測范圍：
2.5 pg/mL - 80 pg/mL
靈敏度：
di檢測濃度小于 0.1 pg/mL
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存： 2-8℃。
2．有效期： 6 個月
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