克隆感受態(tài)細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述：青旗生物提供一百余種基因型不同的克隆感受態(tài)細(xì)胞，滿(mǎn)足您的各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)需求，如：普通質(zhì)粒構(gòu)建、藍(lán)白斑篩選、大質(zhì)粒構(gòu)建、易重組質(zhì)粒構(gòu)建、慢病毒和腺病毒載體構(gòu)建、甲基化DNA克隆、高質(zhì)量質(zhì)粒提取、文庫(kù)構(gòu)建等。
同時(shí)我們還提供多種電擊感受態(tài)細(xì)胞，為大質(zhì)粒構(gòu)建、高效率轉(zhuǎn)化和文庫(kù)構(gòu)建提供方便。

更新時(shí)間：2021-07-20

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品牌	其他品牌	供貨周期	現(xiàn)貨
主要用途	僅用于科研	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

一、克隆感受態(tài)細(xì)胞基因型

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

二、產(chǎn)品說(shuō)明

DH5α菌株是實(shí)驗(yàn)室常用的感受態(tài)細(xì)胞。缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍(lán)、白斑篩選。DH5α感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>5×108 cfu/μg DNA。

三、克隆感受態(tài)細(xì)胞操作方法

1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

四、注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。