克隆感受態細胞主要采用理化方法誘導細胞，吸收周圍環境中的DNA分子，使其處于最適攝取和容納外來DNA的生理狀態。它的主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現一些孔洞，便于外源基因或載體進入感受態細胞。由于細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。
克隆感受態細胞操作方法：
1、DH5α感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手bo打EP管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰中靜置25分鐘；
2、42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率；
3、向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘；
4、5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上；
5、將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15小時。
注意事項：
1、感受態細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率；
2、混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作；
3、轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。
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